ミトファジーの検査はどのように行いますか?

ミトファジーの検査

マイトファジーは、オートファゴソームによるミトコンドリアの選択的分解を伴うオートファジーの特殊な形態です。マイトファジーは細胞の恒常性維持に重要な役割を果たしており、その機能不全は神経変性疾患や癌などのさまざまな疾患に関連しています。マイトファジーの検査には複数の手法が使用され、それぞれがプロセスのさまざまな側面についての洞察を提供します。

1. 蛍光顕微鏡

蛍光顕微鏡法は、生きた細胞におけるミトファジーを観察するために広く使用されている方法です。この技術では、ミトコンドリアとオートファゴソームを標識するために蛍光タグがよく使用されます。一般的なアプローチは、リソソームの酸性 pH に反応して励起スペクトルを変化させ、ミトコンドリアがリソソームに運ばれたことを示す蛍光タンパク質であるミトケイマを使用することです。

2. ウエスタンブロット

ウェスタンブロット分析は、ミトファジーの指標として特定のミトコンドリアタンパク質の分解を検出するために使用できます。VDAC (電圧依存性アニオンチャネル) や複合体 Vサブユニットなどのミトコンドリアタンパク質のレベルの低下は、ミトファジーの発生を示唆します。

3. フローサイトメトリー

フローサイトメトリーにより、細胞集団におけるミトファジーの定量分析が可能になります。ミトコンドリアタンパク質に対する蛍光標識抗体を使用するか、ミトコンドリア色素を使用することで、研究者はミトコンドリアの質量または電位の変化を評価し、ミトファジーを示唆することができます。

4. レポーターアッセイ

レポーターアッセイでは、ミトファジー活性をシグナルする遺伝子コード化レポーターを使用します。一例として、ミトファジー中にオートファゴソームに移動するLC3融合タンパク質があります。ミトコンドリア上の LC3 の存在は、蛍光顕微鏡法または生化学的方法によって検出でき、ミトファジーの証拠となります。

5. 透過型電子顕微鏡（TEM）

TEM は、ミトコンドリアがオートファゴソームに取り込まれる様子を直接示す高解像度の画像を提供します。この方法は、細胞レベルでオートファジーのプロセスを直接観察できるため、ミトファジーの発生を確認するためのゴールドスタンダードと考えられています。

これらの方法にはそれぞれ利点と限界があり、さまざまな実験設定でマイトファジーを確認および定量化するために、これらを組み合わせて使用​​されることがよくあります。